La progresión del cáncer colorrectal (CCR) se ve favorecida por la evasión inmune, aunque los mecanismos moleculares subyacentes aún no se han caracterizado por completo. CD276 (B7-H3), una glicoproteína de punto de control inmunitario que se sobreexpresa con frecuencia en tumores agresivos, está ampliamente modificada por la glicosilación, un proceso que se sabe que regula la estabilidad, la localización y las interacciones inmunitarias de las proteínas.
Sin embargo, sus funciones dependientes de la glicosilación en el CCR siguen sin estar claras. Se analizaron los datos transcriptómicos de TCGA para identificar alteraciones en los genes relacionados con la glicosilación que estén vinculadas al pronóstico del paciente. Se realizó un perfil del O-glicoma del CCR avanzado y de la mucosa normal mediante espectrometría de masas. Se examinó la expresión y la glicosilación de CD276 en tumores primarios, ganglios linfáticos y metástasis mediante inmunohistoquímica, ensayos de ligación de proximidad e inmunofluorescencia dual.
Se reanalizaron los conjuntos de datos proteómicos de CCR de PRIDE (90 casos) para cartografiar la glicosilación inmadura de CD276 en los diferentes estados de diferenciación. Se generaron líneas celulares de CCR con knockout de C1GALT1 mediante CRISPR-Cas9 para imitar la glicosilación inmadura en los tumores, y se silenció CD276 con siRNA. Se utilizaron inmunoprecipitación, inmunoblot con lectinas, ensayos de estabilidad de proteínas, proliferación, invasión, fosfoproteómica y experimentos de cocultivo con células T para evaluar las consecuencias funcionales. La disminución de la expresión de B3GNT6 y C1GALT1 o C1GALT1C1 definió un fenotipo de O-glicosilación inmadura asociado con un mal pronóstico.
El perfil glicómico reveló fenotipos glicanos enriquecidos en Tn y sialil-Tn (sTn) tanto en tumores de tipo epitelial como mesenquimal, con patrones específicos del subtipo. CD276 se colocalizó con Tn y sTn, presentó O-glicanos inmaduros ausentes en los tejidos sanos y se enriqueció en el CCR de lado derecho y metastásico, lo que se correlacionó con una peor supervivencia. El reanálisis de PRIDE sugirió una expresión generalizada de CD276 y reveló una glicosilación relacionada con la diferenciación, que fue más densa en los dominios IgV e IgC de los tumores de tipo epitelial y más dispersa, cerca de la membrana, en los tumores de tipo mesenquimal. El knockout de C1GALT1 en las células de CCR mejoró la invasión al tiempo que aumentaba la estabilidad y la transcripción de CD276, lo que provocó su sobreexpresión.
CD276 glicosilado de forma aberrante promovió la proliferación, la invasión, la señalización impulsada por quinasas y la supresión de las células T, al tiempo que dirigió las citocinas hacia la inmunosupresión. TCGA confirmó que la alta expresión de CD276 y la baja expresión de C1GALT1 se correlacionaron con las firmas transcripcionales de una mayor actividad del punto de control inmunitario y el agotamiento de las células T. La glicosilación inmadura de CD276 promueve la agresividad del CCR y la evasión inmune, lo que representa un posible biomarcador pronóstico y un objetivo terapéutico.
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