Diseño, desarrollo y evaluación funcional de un anticuerpo basado en nanobodies dirigido contra CD73 para inducir la muerte celular inmunogénica en una línea celular de cáncer colorrectal resistente a la quimioterapia.

CD73 es una ectoenzima inmunosupresora clave que se sobreexpresa en el cáncer colorrectal (CRC), lo que facilita la evasión inmune tumoral al generar adenosina. Si bien los anticuerpos monoclonales han demostrado ser prometedores, su limitada penetración en los tejidos restringe su eficacia. Los nanobodies, debido a su pequeño tamaño y alta estabilidad, ofrecen una nueva plataforma terapéutica. El objetivo de este estudio fue diseñar, producir y evaluar funcionalmente una proteína recombinante basada en nanobodies anti-CD73 capaz de estimular la inmunidad antitumoral en una línea celular tumoral.

Diseñamos HeLiNa-73, un nuevo nanobody anti-CD73, mediante la transferencia de CDR del anticuerpo clínico IPH5301 a un andamiaje de nanobody. HeLiNa-73 se expresó en E. coli, se purificó y se caracterizó para determinar su afinidad de unión, citotoxicidad e inducción de marcadores de muerte celular inmunogénica (ICD). Los ensayos funcionales evaluaron la exposición a calreticulina (CALR), la liberación de HMGB1, la secreción de ATP, la apoptosis y la maduración de las células dendríticas (DC). HeLiNa-73 mostró una unión favorable a CD73 y una potente citotoxicidad en las células HT-29 de CRC (CI50 = 23,99 µg/mL).

El tratamiento aumentó significativamente la exposición a CALR (12,4 % frente a 1,2 % del control, p < 0,05) y la liberación de HMGB1 (>10 veces, p < 0,001), aunque la liberación de ATP no cambió. HeLiNa-73 promovió significativamente la apoptosis y mejoró la maduración de las DC, con una regulación al alza de CD80/CD86 tras el cocultivo con células tumorales tratadas. HeLiNa-73 combina la inhibición de CD73 con la inducción de ICD, superando así la supresión inmune mediada por la adenosina y mejorando la inmunogenicidad tumoral.

Estos hallazgos in vitro destacan a HeLiNa-73 como un candidato de nueva generación basado en nanobodies para estudios in vivo de CRC resistente a la quimioterapia y para potenciar la combinación con el bloqueo de puntos de control.