Los macrófagos asociados al tumor (MAT), en particular el subtipo M2, favorecen la supresión inmune y la metástasis en el cáncer colorrectal (CCR). Aunque WNT2 está sobreexpresado en varios tipos de cáncer y RUNX1 es un factor de transcripción oncogénico en tumores sólidos, no estaba claro si un eje RUNX1-WNT2 orquesta la polarización M2 y la progresión del CCR. Analizamos la expresión de RUNX1 y WNT2 y sus correlaciones con los marcadores M2 en TCGA_COAD/READ utilizando GEPIA y validamos los hallazgos en 36 pares de tejidos de CCR y tejidos adyacentes mediante qRT-PCR, Western blot e inmunohistoquímica. Se probaron los efectos funcionales de WNT2 en líneas celulares de CCR (SW480, SW620) utilizando los ensayos CCK-8, formación de colonias y Transwell después de la inhibición con shRNA.
Un cocultivo en Transwell con macrófagos THP-1 diferenciados con PMA evaluó la polarización mediante citometría de flujo (CD86, CD206) y Western blot (CD68, MAC2, CD20), junto con ensayos ELISA para CCL2, CSF1 e IL-10. Se examinó la regulación de WNT2 por RUNX1 mediante la predicción JASPAR/UCSC, ChIP-qPCR y ensayos de reportero de luciferasa dual. In vivo, evaluamos el crecimiento tumoral (xenoinjertos subcutáneos) y la metástasis pulmonar (inyección en la vena de la cola) después de la inhibición de WNT2 y realizamos estudios de rescate utilizando un anticuerpo neutralizante de IL-10 o el inhibidor de CSF1R BLZ945. Se encontró que WNT2 estaba significativamente sobreexpresado en el CCR en comparación con los tejidos normales y se asoció positivamente con las firmas M2-TAM.
La inhibición de WNT2 redujo la viabilidad, la capacidad de formación de colonias, la migración y la invasión de las células de CCR, redujo la secreción de CCL2/CSF1/IL-10 y cambió los macrófagos THP-1 de un fenotipo similar a M2 (CD206+) a un fenotipo similar a M1 (CD86+). La expresión de RUNX1 se correlacionó con WNT2; la pérdida de RUNX1 disminuyó WNT2, mientras que la sobreexpresión lo aumentó. Los ensayos ChIP y de reportero demostraron la unión directa de RUNX1 y la activación transcripcional del promotor de WNT2. In vivo, el silenciamiento de WNT2 redujo el volumen y el peso del tumor, aumentó los macrófagos CD86+ y disminuyó los macrófagos CD206+ en los tumores y disminuyó la carga metastásica pulmonar.
Además, el bloqueo de la polarización M2 (anti-IL-10) o el agotamiento de los macrófagos (BLZ945) atenuaron el crecimiento tumoral impulsado por WNT2 y la infiltración de M2. RUNX1 activa directamente WNT2 para promover la producción de citocinas y la polarización de macrófagos M2, acelerando así el crecimiento y la metástasis del CCR.
Estos hallazgos sugieren que el direccionamiento del eje RUNX1-WNT2 y sus programas de macrófagos posteriores pueden ofrecer una estrategia terapéutica y un posible marco de biomarcadores para el CCR.
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