SMAD4 es un efector transcripcional central de la vía de señalización de TGF-{beta} y un gen supresor tumoral que se inactiva con frecuencia en diversos cánceres. Las mutaciones con cambio de sentido en su dominio MH2 se encuentran entre las alteraciones somáticas más prevalentes en el cáncer colorrectal (CCR). Estas mutaciones se asocian con la progresión de la enfermedad y un mal pronóstico, pero sus consecuencias mecanísticas precisas no se han caracterizado por completo. Aquí, mostramos que las mutaciones en el punto caliente del dominio MH2 de SMAD4 derivadas del CCR (D351H, S357P, R361C y R361H) alteran selectivamente el reclutamiento de coactivadores sin interrumpir la ocupación de la cromatina.
El perfilado mediante RNA-seq demostró una supresión generalizada de la expresión de los genes diana de TGF-{beta} en todos los mutantes. En particular, las mutaciones confieren distintos grados de falta de respuesta a la vía de TGF-{beta}: R361H es completamente refractaria a la estimulación por TGF-{beta}, mientras que R361C y S357P conservan una respuesta transcripcional parcial, lo que sugiere diferencias alélicas en la gravedad de la alteración de la interacción con el coactivador. El análisis de la unión a la cromatina a nivel del genoma mediante greenCUT&RUN confirmó que todos los mutantes mantienen una ocupación genómica similar a la del tipo salvaje, como se esperaba dado que el dominio de unión al ADN MH1 está intacto en cada caso. La espectrometría de masas de biotinilación dependiente de la proximidad en células COLO205 reveló que los cuatro mutantes exhiben interacciones marcadamente reducidas con el complejo de histona acetiltransferasa CREBBP/EP300 y BRD4 en relación con SMAD4 de tipo salvaje, lo que identifica una alteración en la interacción con el coactivador.
En conjunto, nuestros hallazgos establecen que las mutaciones de SMAD4 MH2 alteran la transcripción inducida por TGF-{beta} al reducir selectivamente el reclutamiento de CREBBP/EP300, lo que proporciona un mecanismo molecular para el fenotipo de pérdida de función de SMAD4 en el CCR. Resumen gráfico O_FIG O_LINKSMALLFIG WIDTH=200 HEIGHT=154 SRC="FIGDIR/small/735541v1_ufig1.gif" ALT="Figura 1000"> Ver versión ampliada (24K): org.highwire.dtl.DTLVardef@c37a67org.highwire.dtl.DTLVardef@1993900org.highwire.dtl.DTLVardef@6d6215org.highwire.dtl.DTLVardef@1428228_HPS_FORMAT_FIGEXP M_FIG C_FIG
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