Un método sencillo para analizar el crecimiento competitivo de múltiples tipos de células en tumores de xenoinjerto.

Las bajas tasas de aceptación y la variabilidad intertumoral en las tasas de crecimiento pueden limitar la eficacia de los modelos de xenoinjertos en ratones al comparar entre grupos. Para abordar este problema, desarrollamos un método sencillo para comparar múltiples tipos de células dentro de un único xenoinjerto mixto. Las líneas o clones celulares individuales se transducen con un vector lentiviral que incluye una etiqueta de PCR única, lo que permite el uso de qPCR para determinar la proporción de cada tipo de célula etiquetada dentro de un tumor de xenoinjerto mixto. Generamos vectores con seis etiquetas de PCR distintas y dos marcadores seleccionables diferentes, y hemos optimizado el enfoque para determinar sus proporciones relativas dentro de una mezcla.

Se utiliza un paso de preamplificación inicial para aumentar la cantidad de material para las reacciones de qPCR posteriores. Esto también elimina la mayor parte del ADN genómico, aumentando la especificidad del paso de qPCR. A continuación, las muestras se utilizan para qPCR con pares de cebadores específicos que distinguen entre cada una de las etiquetas de PCR individuales, y la proporción relativa de cada etiqueta se determina en relación con la proporción de la mezcla inicial. Hemos probado este enfoque para el crecimiento in vitro de cultivos celulares mixtos y en un modelo de xenoinjerto cecal ortotópico utilizando una línea celular de cáncer de colon humano.

Dado que cada tumor individual se inicia con una mezcla de células, se pueden analizar por separado múltiples tumores dentro de un mismo animal, y el tamaño general del tumor no es importante. De manera similar, se pueden analizar individualmente múltiples lesiones metastásicas del mismo animal.

Por lo tanto, cada tumor proporciona una comparación directa entre las líneas o clones celulares etiquetados individualmente. Este enfoque de "codificación por barras" de bajo rendimiento es sencillo y rentable, y tiene el potencial de reducir el número de animales necesarios para los experimentos de xenoinjertos.