La molécula de adhesión celular epitelial (EpCAM) se sobreexpresa con frecuencia en el cáncer colorrectal (CCR) y, por lo tanto, representa un atractivo objetivo terapéutico.
Sin embargo, la eficacia clínica de los anticuerpos dirigidos a EpCAM se ha visto limitada por unas propiedades de unión subóptimas y la dependencia de los mecanismos efectores inmunitarios. Aquí, describimos el desarrollo y la caracterización del anti-EpCAM #126, un anticuerpo monoclonal totalmente humano aislado de la biblioteca de fagos OPAL, y su correspondiente conjugado anticuerpo-fármaco (ADC). El anti-EpCAM #126 exhibió una afinidad de unión sustancialmente mayor que el adecatumumab, principalmente debido a una tasa de disociación notablemente menor. El análisis de microarrays de péptidos de alta densidad y la mutagénesis por barrido de alanina identificaron NGSKLGRRAK (residuos 74-83) dentro del dominio extracelular de EpCAM como el epítopo dominante, con S76, R81 y K83 como residuos de contacto clave.
La unión dependía de la conformación y disminuyó notablemente tras la escisión proteolítica mediada por tripsina de la región del epítopo. El anti-EpCAM #126 demostró una tinción robusta de xenoinjertos de CCR y tejidos tumorales derivados de pacientes, y exhibió una baja liberación de citocinas en células mononucleares de sangre periférica humana y modelos de ratón. Tras la confirmación de una internalización eficiente mediada por receptores, el anti-EpCAM #126 se conjugó con monometil auristatina E (MMAE) a través de un enlazador valina-alanina escindible por proteasas, generando un ADC con una relación fármaco-anticuerpo media controlada de 4,31, al tiempo que se mantenía una afinidad de unión a EpCAM nanomolar. El ADC resultante exhibió una potente citotoxicidad contra líneas celulares de CCR que expresan EpCAM y logró una inhibición del crecimiento tumoral del 84,96% en un modelo de xenoinjerto derivado de pacientes a 10 mg/kg, mientras que el anticuerpo no conjugado no mostró actividad antitumoral.
Estos hallazgos sugieren que el anti-EpCAM #126-MMAE es un ADC de alta afinidad y específico para el epítopo, con una prometedora eficacia preclínica contra el CCR EpCAM-positivo.
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