Las mutaciones de KRAS son entre las alteraciones oncogénicas más prevalentes en cáncer colorrectal, pulmonar y pancreático, sin embargo, su detección sigue siendo analíticamente desafiante en presencia de un fondo dominante de tipo salvaje (WT). Aquí reportamos una plataforma de genotipificación fotoelectroquímica (PEC) que integra la amplificación isoterma inhibida por clamps (C-LAMP) con transducción PEC impulsada por oxígeno singulete (1O2) sin enzimas para la detección selectiva de mutaciones de KRAS. Los probetas de clamp de ácido nucleico bloqueado (LNA) suprimen selectivamente la amplificación WT durante la amplificación isoterma, enriqueciendo alelos mutantes y permitiendo la discriminación de variantes de nucleótido simple (SNV) con alta especificidad. Los productos amplificados se capturan magnéticamente y se transducen en corriente fotogenerada mediante el ciclo redox inducido por luz visible de 1O2, eliminando los reporteros enzimáticos y reduciendo la interferencia del fondo.
La plataforma C-LAMP/PEC alcanza un límite de detección de 35 copias L-1 (58 aM) y una frecuencia mínima detectable de alelos variantes (VAF) del 4,8% en mezclas genómicas heterogéneas de mutante/WT. El rendimiento analítico se validó en líneas celulares cancerosas y en tejidos frescos congelados derivados de pacientes, mostrando concordancia completa con la secuenciación Nanopore y PCR digital por gotas (ddPCR) dentro del grupo evaluado (n = 16). Este trabajo introduce una estrategia robusta y modular de biosensores PEC que combina supresión molecular WT sin enzimas con fotoelectroquímica, ofreciendo un enfoque económicamente competitivo e instrumentalmente simplificado para el análisis clínicamente relevante de mutaciones de KRAS hacia pruebas descentralizadas.
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