Un estado celular con alta activación de la vía MAPK y baja activación de la vía WNT favorece la diseminación metastásica en el cáncer colorrectal.

El cáncer colorrectal (CCR), una de las principales causas de mortalidad relacionada con el cáncer debido a las metástasis a distancia, está impulsado en gran medida por mutaciones activadoras en las vías WNT y de la proteína quinasa activada por mitógenos (MAPK). Comprender el mecanismo subyacente al proceso metastásico es esencial para desarrollar tratamientos eficaces. Mediante el pasaje ortotópico in vivo en serie, desarrollamos un modelo de ratón inmunocompetente de CCR metastásico. Las células tumorales altamente metastásicas mostraron amplificaciones cromosómicas en los genes de la vía MAPK, lo que resultó en un aumento de la actividad de la vía MAPK y la supresión de los programas transcripcionales asociados a WNT, incluidos los genes de las células madre. La inhibición farmacológica de KRASG12D mutante condujo a una reducción en el estado transcripcional MAPK-alto/WNT-bajo y disminuyó tanto las metástasis pulmonares como las hepáticas. El análisis de los datos de pacientes con CCR reveló que la firma génica metastásica asociada con el estado MAPK-alto/WNT-bajo se correlacionó con peores resultados de supervivencia. Estos hallazgos subrayan la plasticidad de las células iniciadoras de metástasis en el CCR, impulsada por los roles opuestos de la señalización MAPK y WNT, a pesar de su sinergia observada durante la tumorigénesis del colon.

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Fig. 1: Generación de un modelo de ratón inmunocompetente de CCR metastásico. El texto alternativo para esta imagen puede haber sido generado utilizando IA. Fig. 2: Los cambios en las propiedades intrínsecas del tumor mejoran el potencial metastásico de los organoides pasados in vivo. El texto alternativo para esta imagen puede haber sido generado utilizando IA. Fig. 3: Enriquecimiento diferencial de las vías de señalización MAPK y WNT en los tumores metastásicos. El texto alternativo para esta imagen puede haber sido generado utilizando IA. Fig. 4: La dinámica de la accesibilidad de la cromatina específica de la vía revela la activación de MAPK y la supresión de WNT en los tumores metastásicos. El texto alternativo para esta imagen puede haber sido generado utilizando IA. Fig. 5: La inhibición de KRASG12D revierte el estado transcripcional de las células metastásicas a un estado de células no metastásicas. El texto alternativo para esta imagen puede haber sido generado utilizando IA. Fig. 6: La alta actividad de MAPK junto con la baja actividad de WNT se asocia con una menor supervivencia general en pacientes con CCR. El texto alternativo para esta imagen puede haber sido generado utilizando IA.

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Los datos de secuenciación de ARN a granel, scRNA-seq y ATAC-seq de ratón que respaldan los hallazgos de este estudio se han depositado en el Gene Expression Omnibus bajo el número de acceso de SuperSeries GSE283937. Los datos de secuenciación del genoma completo (WES) de ratón se han depositado en el Sequence Read Archive con los números de acceso PRJNA1196349 y SRP559178. Los datos de secuenciación de ARN de humanos de los estudios AVANT27 y CALGB28 están disponibles en el European Genome-phenome Archive bajo el número de estudio EGAS50000001231. Todos los demás datos que respaldan los hallazgos de este estudio están disponibles en el artículo y en su información complementaria. Los datos de origen se proporcionan con este artículo. Disponibilidad del código

No se generó ningún código personalizado para este estudio. El código R con datos intermedios se depositó en GitHub (https://github.com/Genentech/2025heinleinetal) y está disponible públicamente a través de Zenodo en https://doi.org/10.5281/zenodo.17993514 (ref. 80). Referencias
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Conflictos de intereses
Todos los autores eran o fueron empleados por Genentech en el momento de sus contribuciones al trabajo y poseen acciones de Roche. Revisión por pares

Información de la revisión por pares
Nature Cancer agradece a Sergei Grivennikov, Omer Yilmaz y al otro revisor anónimo por su contribución a la revisión por pares de este trabajo. Información adicional Nota del editor Springer Nature se mantiene neutral con respecto a las reclamaciones jurisdiccionales en los mapas publicados y las afiliaciones institucionales. Datos ampliados Figura de datos ampliados 1 Generación de un modelo inmunocompetente de CRC metastásico fiable. a, Esquema de la generación paso a paso de organoides intestinales AKPS (Apc−/−, KrasG12D, Trp53−/−, Smad4−/−) a partir de ratones C57BL/6 N utilizando CRISPR/Cas9, incluido el medio de selección utilizado para seleccionar mutaciones individuales. Las ilustraciones de a se crearon en BioRender; Heinlein, M. https://biorender.com/y25q621 (2025). b, Haplotipos de Apc, Kras, Trp53 y Smad4 de los organoides parentales AKPS (P0). Solo se muestran las regiones que contienen los sitios de unión de las secuencias de ARN guía. Snp: polimorfismo de un solo nucleótido; Chr: cromosoma. c, Porcentaje de ratones NSG (n = 10) y ratones C57BL/6 N (n = 13) que presentan un tumor de colon primario en el punto final humanitario tras la inyección ortotópica de organoides parentales (P0) AKPS. d, Esquema de la estrategia de pasaje ortotópico in vivo utilizada para mejorar el potencial metastásico de los organoides AKPS. Los números indican los identificadores de los animales de los que se aislaron las metástasis, se expandieron in vitro y se reinjectaron en nuevas cohortes de ratones C57BL/6 N. Las líneas de pasaje 1 (P1; m4) y pasaje 5 (P5; m484) utilizadas para los experimentos posteriores se resaltan en rojo. El esquema de d se creó en BioRender; Heinlein, M. https://biorender.com/v45k881 (2025). e, Número total de metástasis pulmonares macroscópicas por ratón C57BL/6 N en el punto final humanitario tras la inyección ortotópica de organoides AKPS P1 (m4) o P5 (m484) en el colon. P1 (m4) n = 7, P5 (m484) n = 5 ratones. Los grupos se compararon con la prueba U de Mann-Whitney (no emparejada, sin distribución gaussiana, de dos colas). Los valores de p se muestran en el panel correspondiente. f-h, Gráficos de supervivencia (f), porcentaje de ratones C57BL/6 N que presentan metástasis hepáticas macroscópicas (g) y número total de metástasis hepáticas macroscópicas por ratón C57BL/6N (h) en el punto final humanitario tras la inyección ortotópica de organoides AKPS P5 (m484). Los datos presentados se recopilan de tres experimentos independientes. Repetición 1 n = 20 ratones; Repetición 2 n = 16 ratones; Repetición 3 n = 12 ratones. Para g, cada punto representa el porcentaje de ratones con metástasis para cada repetición. Nota: los datos presentados para P5m4841 son los mismos que los presentados en la figura 1d. Para h, cada punto representa un ratón individual. El número que aparece encima de cada gráfico de barras muestra el número medio de metástasis por ratón. Nota: los datos presentados para P5m4841 son los mismos que los presentados en la figura 1e. i-j, Imágenes representativas de hígados de ratones C57BL/6 N tras la inyección ortotópica de organoides AKPS P5 (m484) en el punto final humanitario, que se muestran desde la parte superior (i) y desde la parte inferior (j). e, g, h, Los datos se presentan como media ± SEM. Fuente de datos Figura de datos ampliados 2 Los cambios intrínsecos al tumor mejoran el potencial metastásico en los organoides pasados in vivo. a, Número total de mutaciones somáticas (mutaciones sin sentido, degradación mediada por ARN (NMD), cambio de marco, pérdida de inicio o ganancia de parada) en relación con la muestra parental P0 en los organoides P1 (m4), P2 (m15), P3 (m176), P4 (m484) y P5 (m484), identificadas por al menos dos de tres detectores de variantes con una frecuencia alélica >0,4. NMD, degradación mediada por ARN. b, Mutaciones somáticas en genes individuales en los organoides P1 (m4), P2 (m15), P3 (m176), P4 (m484) y P5 (m484). NMD, degradación mediada por ARN. c, Alteraciones del número de copias en todo el genoma en los organoides P2 (m15), P3 (m176), P4 (m484) en todo el genoma del ratón. rojo, ganancia del número de copias; azul, pérdida del número de copias; chr #, número de cromosoma. a-c, n = 1 réplica por línea de organoides. d, Estrategia de clasificación por FACS de células epiteliales tumorales EpCAM+ vivas a partir de tumores de colon para experimentos de secuenciación posteriores. Los números indican el porcentaje de células dentro de cada puerta. e, Puntuación de enriquecimiento de conjuntos de genes normalizada de todos los conjuntos de genes de Wikipath que se enriquecen significativamente en los organoides P5 (m484) (rojo) o en las células tumorales P1 (m4) (azul). Los gradientes de color representan la significación estadística. NES, puntuación de enriquecimiento normalizada. f, Tiempo de duplicación de los organoides P1 (m4) (verde azulado) y P5 (m484) (granate) in vitro. Los datos se agrupan de dos experimentos biológicos independientes (media de n = 4 réplicas técnicas por experimento) y se presentan como media. g, Peso del tumor primario de colon (círculos) con el número correspondiente de metástasis hepáticas macroscópicas (cuadrados) en ratones a los que se inyectaron ortotópicamente los organoides P1 (m4) (color aguamarina) y P5 (m484) (color burdeos) en el colon, al final del estudio. n = 7 ratones por grupo. h, Número total de metástasis hepáticas (izquierda) y pulmonares (derecha) macroscópicas por ratón tras la inyección hidroдинаmica en la vena de la cola (HTV) de los organoides P1 (m4) o P5 (m484). Hígado: P1 (m4) n = 10; P5 (m484) n = 10. Los datos son representativos de dos experimentos independientes. Pulmón: P1 (m4) n = 9; P5 (m484) n = 8 ratones. i, Número total de metástasis hepáticas macroscópicas por ratón tras la inyección intrasplénica de los organoides P1 (m4) (n = 4) o P5 (m484) (n = 5). j, Niveles de interferón-gamma (IFNγ) en pg/mL en el microambiente tumoral (TME) de los tumores colorrectales P1 (m4) y P5 (m484) recolectados 4 semanas después de la inyección ortotópica, medidos mediante el ensayo Luminex, con n = 5 ratones por grupo. k, Expresión mediante secuenciación masiva de ARN (logCPM) de Ifngr1 e Ifngr2 en células epiteliales tumorales aisladas de los tumores colorrectales P1 (m4) (n = 4) y P5 (m484) (n = 3). La expresión diferencial se evaluó utilizando limma–voom. Los diagramas de caja muestran la mediana (línea central), el rango intercuartílico (Q1-Q3) y las líneas que se extienden 1,5 veces el rango intercuartílico. l, CXCL9 y CXCL10 en pg/mL en el TME de los tumores colorrectales P1 (m4) y P5 (m484) recolectados 4 semanas después de la inyección ortotópica, medidos mediante el ensayo Luminex con n = 5 ratones por grupo. m, Porcentaje de células CD3+ de las células CD45+ en el TME de los tumores colorrectales P1 (m4) (n = 10) y P5 (m484) (n = 8) 5-6 semanas después de la inyección ortotópica, determinado mediante análisis FACS. n, Histogramas representativos de citometría de flujo (izquierda) y cuantificación de la intensidad media de fluorescencia geométrica (gMFI; derecha) que muestran la expresión superficial de H-2Kb (arriba) y H-2Db (abajo) en los organoides P1 (m4) y P5 (m484) (una réplica técnica cada uno), con esplenocitos incluidos como control positivo. Se muestran los controles de fluorescencia menos uno (FMO) para las muestras de bazo, P1 y P5. Las líneas verticales indican los valores medianos de fluorescencia para las muestras de FMO de P1 y P5. Los datos son representativos de 2 experimentos independientes. o, Número total de metástasis hepáticas macroscópicas por ratón NSG al final del estudio tras la inyección ortotópica de las líneas de organoides indicadas. P0 n = 10; P2 (m15) n = 18; P5 (m484) n = 8 ratones. Los datos de P0 son los mismos que los presentados en la Fig. 1b. h - j, l, m, o, n representa el número de ratones individuales por grupo. Los datos provienen de un único experimento independiente y se presentan como media ± SEM. Los grupos se compararon con la prueba de Mann-Whitney U (no pareados, sin distribución gaussiana, de dos colas). Los valores de p se muestran en los paneles correspondientes. Fuente de datos. Figura extendida 3. Los organoides P5 muestran una mayor expresión de los genes asociados a la vía MAPK y menor sensibilidad a los inhibidores de la vía MAPK. a – b, Haplotipos de Apc, Kras, Trp53 y Smad4 en los organoides P1 (m4) (a) y P5 (m484) (b). Solo se muestran las regiones genómicas que abarcan los sitios de unión del ARN guía. SNP, polimorfismo de un solo nucleótido. c, Análisis de Western Blot de Smad4 en AK, P1 (m4) y P5 (m484). Los datos provienen de un único experimento. d, Cambios en el número de copias de los genes dentro de las vías relacionadas con MAPK17 en los organoides P1 (m4), P2 (m15), P3 (m176), P4 (m824) y P5 (m484) en relación con los organoides P0 (parentales) (n = 1 réplica por línea de organoides), junto con la expresión normalizada (z-score) y el cambio logarítmico de 2 veces de los mismos genes en las células epiteliales tumorales clasificadas de los tumores de colon P1 (m4) (n = 4) y P5 (m484) (n = 3), 5 semanas después de la inyección ortotópica. Los asteriscos indican cambios significativos (FDR ≤ 0,05). Los valores exactos de FDR para todos los cambios se proporcionan en la Tabla Suplementaria 1. Chr, cromosoma; CN, número de copias; stand.exp., expresión estándar; FDR, tasa de descubrimiento falso. e, Curvas de respuesta a la dosis para MRTX1133 en los organoides P1 (m4) y P5 (m484) evaluadas 72 h después del tratamiento. Los datos provienen de un único experimento y se presentan como la media de n = 3 réplicas técnicas por condición. f, Puntuación de enriquecimiento de conjuntos de genes normalizada para las firmas de genes CBC y RSC18 enriquecidas en las células epiteliales tumorales de P5 (m484) (rojo) o P1 (m4) (azul). Los números indican la significación estadística. NES, puntuación de enriquecimiento normalizada. g, Diagrama bidimensional que muestra las puntuaciones de enriquecimiento normalizadas (NES) para las vías en las células epiteliales tumorales clasificadas de P5 (m484) (n = 3 ratones) frente a P1 (m4) (n = 4 ratones) (eje y) y las células de organoides AKQ61RPS frente a AKG12DPS (n = 4 réplicas cada una) (eje x). Cada punto representa una vía, con un tamaño proporcional al número de genes en la vía. Las vías clave enriquecidas se etiquetan y los colores denotan los patrones de regulación: azul, reguladas a la baja en ambas comparaciones; rojo, reguladas al alza en ambas; verde, reguladas al alza solo en P5 y a la baja en AKQ61RPS; naranja, reguladas al alza solo en P5. NES límite = 1; FDR límite = 0,05. Fuente de datos. Figura extendida 4. Diferencial accesibilidad de la cromatina en las células tumorales P5 y P1. a - b, Los diagramas de logotipo muestran los seis motivos de factores de transcripción más enriquecidos y los factores de transcripción asociados en las regiones promotoras (a) y potenciadoras (b) que se abren en las células epiteliales tumorales de P5 (m484). Los valores p ajustados se derivan de pruebas hipergeométricas unilaterales con la tasa de descubrimiento falso de Benjamini-Hochberg (FDR). c, Los 60 motivos de factores de transcripción más enriquecidos en las regiones con mayor accesibilidad en P5 (m484) en comparación con las células epiteliales tumorales de colon P1 (m4). Prueba hipergeométrica unilateral, sin ajuste de valor p para la representación gráfica. d, Diagrama de enriquecimiento que muestra la asociación de la firma YAP22 entre los tumores de colon P5 (m484) y los tumores de colon P1 (m4). Puntuación de enriquecimiento normalizada (NES) de dos colas con corrección de Benjamini-Hochberg. La lista de genes clasificados (basada en las estadísticas t) se muestra a continuación en gris. e - f, Los diagramas de logotipo muestran los seis motivos de factores de transcripción más enriquecidos y los factores de transcripción asociados en las regiones promotoras (e) y potenciadoras (f) que se abren en las células epiteliales tumorales de P1 (m4). Los valores p ajustados se derivan de pruebas hipergeométricas unilaterales con la tasa de descubrimiento falso de Benjamini-Hochberg (FDR). g, Los 60 motivos de factores de transcripción más enriquecidos en las regiones con mayor accesibilidad en P1 (m4) en comparación con las células epiteliales tumorales de colon P5 (m484). Prueba hipergeométrica unilateral, sin ajuste de valor p. h, Diagrama de componentes principales (PCA) de los perfiles de ATAC-seq de los organoides P1 (m4), los organoides P5 (m484) y los organoides P5 (m484) tratados durante 8 días con uno de los inhibidores epigenéticos mostrados (EPZ00477 10 μM; RG108 10 μM; A-485 10 μM; Panobinostat 50 nM). n = 3 réplicas por condición de tratamiento. i, Diagramas de cobertura que muestran la señal ChIP-seq normalizada por tamaño de biblioteca de los datos ENCODE en el locus EMP1 humano en el cromosoma 12. Las pistas muestran BATF ChIP-seq en las células GM12878 (verde, arriba; ID ENCODE - ENCSR000BGT), JUN-B ChIP-seq en las células A549 (marrón, centro; ID ENCODE - ENCSR431LRW) y FOS ChIP-seq en las células MCF-7 (azul, abajo; ID ENCODE – ENCSR569XNP), con dos réplicas individuales que se muestran para cada factor. El cuadro rojo resalta el primer exón de EMP1. Chr, cromosoma. Figura extendida 5. Respuesta de los tumores metastásicos de colon al tratamiento con MRTX1133. a, Expresión relativa determinada por análisis de qRT-PCR de los objetivos de señalización de MAPK Dusp6 y Etv4 en los organoides AKPS que albergan una mutación KRASG12D tras 24 h de tratamiento con concentraciones crecientes del inhibidor de KRASG12D MRTX1133. Dos réplicas técnicas por condición. Los datos se muestran como expresión relativa normalizada a Rpl19. Los datos se muestran como la media. b, Análisis de Western Blot de la actividad de señalización de MAPK en los organoides P1 (m4) y P5 (m484) después del tratamiento con 100 nM de MRTX1133 durante 24 h. Los datos provienen de un único experimento. c, Esquema del tratamiento con MRTX1133 en ratones. Los ratones recibieron MRTX1133 (30 mg/kg i.p. dos veces al día) durante 3 o 16 días a partir de 4,5 semanas después de la inyección ortotópica de P5 (m484) en el colon. inj, inyección. La ilustración en c se creó en BioRender; Heinlein, M. https://biorender.com/q31i735 (2025). d, Peso del tumor primario de colon en los puntos de tiempo indicados. Vehículo y MRTX1133 3 días, n = 4 ratones por grupo; MRTX1133 16 días, n = 5 ratones. e, Células EpCAM+ x 106 por gramo de tejido tumoral de colon determinado por análisis FACS en los tumores de colon P5 (m484) en los puntos de tiempo indicados. n = 4 ratones por grupo. f, Diagrama de componentes principales (PCA) que muestra la distribución de las muestras de secuenciación de ARN en las células epiteliales tumorales clasificadas de P5 (m484) tratadas con vehículo (3 días; negro) o MRTX1133 (3 días, amarillo o 16 días, azul). n = 4 ratones por grupo. g - h, Puntuación de enriquecimiento de conjuntos de genes normalizada de las firmas de genes Wikipath seleccionadas enriquecidas en las muestras con las puntuaciones de PC1 más altas (rojo) o las puntuaciones de PC1 más bajas (azul) (g) o las puntuaciones de PC2 más altas (rojo) o las puntuaciones de PC2 más bajas (azul) (h). Los gradientes de color representan la significación estadística. NES, puntuación de enriquecimiento normalizada. i, Diagrama de enriquecimiento que muestra la asociación de la firma MAPK BETA de P5 (color burdeos) o la firma WNT BETA de P1 (color aguamarina) entre los tumores de colon tratados con MRTX1133 (3 días) en relación con los controles tratados con vehículo. Puntuación de enriquecimiento normalizada (NES) de dos colas con corrección de Benjamini-Hochberg. La lista de genes clasificados (basada en las estadísticas t) se muestra a continuación en gris. j – k, Expresión de ARN estandarizada y cambio logarítmico de 2 veces de la firma de genes objetivo MAPK BETA de P5 (j) o la firma de genes objetivo WNT BETA de P1 (k) en las células epiteliales tumorales clasificadas de los tumores de colon P5 (m484) de los ratones tratados con vehículo (3 días) o MRTX1133 (3 días o 16 días). Los asteriscos representan los cambios que son significativos (FDR ≤ 0,05). Los valores exactos de FDR para todos los cambios se proporcionan en la Tabla Suplementaria 1. n = 4 ratones por grupo. veh, vehículo. l – m, Puntuación de enriquecimiento de conjuntos de genes normalizada de las firmas de genes CBC y RSC18 en las células epiteliales tumorales de P5 (m484) aisladas de los tumores primarios tratados con MRTX1133 o vehículo durante 3 días (l) o 16 días (m). Los números indican la significación estadística. Para d - f: Cada símbolo representa un ratón. d - e, Los datos se presentan como la media ± SEM. Los grupos se compararon con la prueba de Mann-Whitney U (no pareados, sin distribución gaussiana, de dos colas). Los valores de p se muestran en los paneles correspondientes. Fuente de datos. Figura extendida 6. La inhibición de KRASG12D suprime la señalización de YAP en los tumores metastásicos de colon. a - b, Diagrama de enriquecimiento que muestra la asociación de la firma YAP22 entre los tumores de colon P5 (m484) tratados con MRTX1133 durante 3 días (a) o 16 días (b) con los controles tratados con vehículo. Puntuación de enriquecimiento normalizada (NES) de dos colas con corrección de Benjamini-Hochberg. La lista de genes clasificados (basada en las estadísticas t) se muestra a continuación en gris. c, Expresión relativa determinada por análisis de qRT-PCR de los genes objetivo de WNT Lgr5, Smoc2, Nkd1 (arriba), los genes objetivo de MAPK Emp1, Dusp4, Dusp6 (centro) y los genes asociados a YAP/TEAD Ctgf y Cyr61 (abajo) en los organoides P5 (m484) tratados con DMSO, el inhibidor de KRASG12D MRTX1133 (100 nM), el inhibidor de TEAD GNE-7883 (1 μM) o la combinación (combo) durante 48 h. Los datos se muestran como expresión relativa normalizada a Rpl19. Los símbolos representan réplicas técnicas (n = 3 por condición de tratamiento) de un único experimento; los gráficos de barras muestran la media. d – e, Intensidad media de fluorescencia geométrica (gMFI) de H-2Db (d) y H-2Kb (e) en las células epiteliales tumorales EpCAM+ de los tumores primarios de colon después de 14 días de tratamiento con MRTX1133 o control de vehículo. Los ratones fueron tratados 3 semanas después de la inyección ortotópica. n = 3 ratones por grupo. f, Porcentaje de células T CD3+ entre las células inmunitarias CD45+ en los tumores primarios de colon después de 3 o 16 días de tratamiento con MRTX1133. Los ratones fueron tratados 4,5 semanas después de la inyección ortotópica. n = 4 ratones por grupo. Para d - f: Cada símbolo representa un ratón. Los datos se presentan como la media ± SEM. Los grupos se compararon con la prueba de Mann-Whitney U (no pareados, sin distribución gaussiana, de dos colas). Los valores de p se muestran en los paneles correspondientes. Fuente de datos. 7. Respuesta de las lesiones metastásicas en el hígado y el pulmón al tratamiento con MRTX1133. a–b, Imágenes representativas de la inmunohistoquímica (ISH) de Dusp4 (amarillo) y Emp1 (magenta) e imágenes combinadas (DAPI, azul) en metástasis hepáticas (a) y pulmonares (b) de ratones a los que se inyectaron ortotópicamente organoides P5 (m484) y que fueron tratados 5 semanas después de la inyección con vehículo (parte superior), MRTX1133 durante 3 días (centro) o 14 días (parte inferior). c–d, Imágenes representativas de la inmunohistoquímica (ISH) de Dusp4 (amarillo) y Smoc2 (magenta) e imágenes combinadas (DAPI, azul) en metástasis hepáticas (c) y pulmonares (d) en las mismas condiciones de tratamiento. Debido a la cantidad limitada de material, las metástasis pulmonares no se evaluaron después de 14 días de tratamiento (d). Barras de escala, 50 µm. Se utilizaron secciones de n = 3 ratones por grupo (a, c, d) o n = 2 ratones por grupo (b). e, Gráficos UMAP de células epiteliales tumorales aisladas de metástasis hepáticas y pulmonares de ratones NSG a los que se inyectaron ortotópicamente organoides AKVPSL7, codificados por el tejido de origen (parte superior) y la identidad del grupo (parte inferior). f–g, Gráficos UMAP que muestran las puntuaciones de la firma P1 WNT BETA (f) y P5 MAPK BETA (g) (parte superior), con los gráficos de violín correspondientes que muestran las distribuciones de puntuaciones en los grupos (parte inferior). h–i, Gráficos UMAP que muestran la expresión de Smoc2 (h) y Emp1 (i) (parte superior), con los gráficos de violín correspondientes que muestran las distribuciones de expresión en los grupos (parte inferior). Para f–i (parte inferior), los gráficos de caja muestran la mediana (línea central), el rango intercuartílico (caja) y los límites del rango intercuartílico de 1,5 veces (bigotes). j, Imágenes representativas de inmunofluorescencia de la localización de β-catenina en metástasis hepáticas (parte superior) y pulmonares (parte inferior) de ratones NSG a los que se inyectaron ortotópicamente organoides AKVPSL7, con recuadros de mayor aumento que resaltan la localización subcelular. Se utilizaron secciones de n = 3 ratones por grupo. Barra de escala, 75 µm; barra de escala del recuadro, 10 µm.

Figura de datos ampliados 8. Clasificación de pacientes con CRC según las firmas de las vías MAPK y WNT. a–b, Gráficos de dispersión de las puntuaciones de la firma canónica de MAPK frente a las puntuaciones de la firma canónica de WNT para pacientes individuales en los conjuntos de datos CALGB (a) y AVANT (b). Los pacientes se estratifican en relación con la mediana de cada distribución: MAPK y WNT por encima de la mediana (rojo oscuro), MAPK por debajo de la mediana y WNT por encima de la mediana (púrpura), MAPK por encima de la mediana y WNT por debajo de la mediana (verde) y MAPK y WNT por debajo de la mediana (azul oscuro). c, Puntuaciones de la firma de genes diana de MAPK en muestras de cáncer colorrectal KRAS mutante (MUT; n = 216 pacientes) y KRAS de tipo salvaje (WT; n = 258 pacientes) del conjunto de datos AVANT. Prueba de Wilcoxon de dos colas. Los gráficos de caja muestran los puntos de datos individuales, con la línea central que indica la mediana, la caja que representa el rango intercuartílico y los bigotes que se extienden hasta 1,5 veces el rango intercuartílico. d, Curvas de supervivencia general de Kaplan-Meier para pacientes KRAS mutantes (verde) y KRAS de tipo salvaje (púrpura) en el conjunto de datos AVANT. Las razones de riesgo y los valores de p se determinaron utilizando la regresión de riesgos proporcionales de Cox (de dos colas) sin corrección para múltiples pruebas. Las líneas sólidas representan las estimaciones de Kaplan-Meier, con las áreas sombreadas que indican los intervalos de confianza de dos colas del 95%.

Información complementaria. Resumen del informe (descargar PDF). Tablas complementarias (descargar XLSX). Tablas complementarias 1–8. Fuente de datos. Figura de datos 1 (descargar XLSX). Datos fuente estadísticos para la figura 1, con cada elemento de la figura en una pestaña separada. Fuente de datos. Figura 2 (descargar XLSX). Datos fuente estadísticos para la figura 2, con cada elemento de la figura en una pestaña separada. Fuente de datos. Figura 3 (descargar XLSX). Datos fuente estadísticos para la figura 3, con cada elemento de la figura en una pestaña separada. Fuente de datos. Figura 5 (descargar XLSX). Datos fuente estadísticos para la figura 5, con cada elemento de la figura en una pestaña separada. Fuente de datos. Figura de datos ampliados 1 (descargar XLSX). Datos fuente estadísticos para la figura de datos ampliados 1, con cada elemento de la figura en una pestaña separada. Fuente de datos. Figura de datos ampliados 2 (descargar XLSX). Datos fuente estadísticos para la figura de datos ampliados 2, con cada elemento de la figura en una pestaña separada. Fuente de datos. Figura de datos ampliados 3 (descargar XLSX). Datos fuente estadísticos para la figura de datos ampliados 3, con cada elemento de la figura en una pestaña separada. Fuente de datos. Figura de datos ampliados 3 (descargar PDF). Imágenes de Western blot no procesadas para la figura de datos ampliados 3c. Fuente de datos. Figura de datos ampliados 5 (descargar XLSX). Datos fuente estadísticos para la figura de datos ampliados 5, con cada elemento de la figura en una pestaña separada. Fuente de datos. Figura de datos ampliados 5 (descargar PDF). Imágenes de Western blot no procesadas para la figura de datos ampliados 5b. Fuente de datos. Figura de datos ampliados 6 (descargar XLSX). Datos fuente estadísticos para la figura de datos ampliados 6, con cada elemento de la figura en una pestaña separada.

Derechos y permisos. Springer Nature o su licenciante (por ejemplo, una sociedad u otro socio) posee los derechos exclusivos de este artículo en virtud de un acuerdo de publicación con el(los) autor(es) u otro(s) titular(es) de derechos; la auto-publicación del autor de la versión del manuscrito aceptado de este artículo se rige únicamente por los términos de dicho acuerdo de publicación y la ley aplicable. Reproducciones y permisos. Acerca de este artículo. Cite este artículo. Heinlein, M., Li, G.X., Kljavin, N. et al. A high-MAPK, low-WNT cell state drives metastatic dissemination in colorectal cancer. Nat Cancer (2026). https://doi.org/10.1038/s43018-026-01155-w. Descargar cita. Recibido: 17 de enero de 2025. Aceptado: 17 de marzo de 2026. Publicado: 07 de mayo de 2026. Versión de registro: 07 de mayo de 2026. DOI: https://doi.org/10.1038/s43018-026-01155-w.