Caracterización molecular de las metástasis ováricas derivadas del cáncer colorrectal mediante el análisis del ADN tumoral circulante.

Las metástasis ováricas del cáncer colorrectal (CCR), comúnmente denominadas tumores de Krukenberg, constituyen una manifestación rara pero biológicamente distinta de la diseminación metastásica. Aunque su incidencia es limitada, la afectación ovárica se asocia constantemente con un comportamiento clínico agresivo y una supervivencia inferior en comparación con otros sitios metastásicos [(1)], [(2)], [(3)]. Si bien las series retrospectivas sugieren que la resección completa de las metástasis ováricas aisladas puede conferir un beneficio en la supervivencia en pacientes seleccionados [(4)], [(5)], la toma de decisiones terapéuticas sigue basándose en gran medida en los esquemas de tratamiento desarrollados para las metástasis hepáticas y pulmonares, sin una consideración específica de la biología tumoral ovárica. La evidencia acumulada indica que el CCR metastásico no se comporta de manera uniforme en los diferentes compartimentos anatómicos. En particular, se ha informado que las metástasis ováricas presentan respuestas terapéuticas discordantes, con progresión de las lesiones ováricas a pesar del control de la enfermedad en sitios extraováricos durante la quimioterapia sistémica [(3)], [(6)]. Estas observaciones sugieren que el microambiente ovárico puede imponer presiones selectivas distintas, lo que influye en la expansión clonal, la exposición a fármacos y las trayectorias evolutivas del tumor. Esta heterogeneidad específica del sitio subraya la importancia de la caracterización molecular en lugar de depender únicamente de la clasificación anatómica de las metástasis.

El análisis del ácido desoxirribonucleico tumoral circulante (ctDNA) proporciona una plataforma mínimamente invasiva para la evaluación en tiempo real de las alteraciones genómicas derivadas del tumor y la carga tumoral cuantitativa. En el CCR, la positividad del ctDNA postoperatorio ha surgido como un marcador sólido de enfermedad residual mínima y riesgo de recurrencia [(7)], [(8)], [(9)], [(10)]. Más allá de la predicción de la recurrencia, el perfilado del ctDNA permite la investigación de la arquitectura clonal y los patrones de mutación dinámicos. Sin embargo, el panorama del ctDNA de los fenotipos metastásicos raros, incluidas las metástasis ováricas, sigue sin definirse. No se sabe si la carga de ctDNA y la dinámica de la mutación reflejan el comportamiento biológico distinto del CCR metastásico ovárico. Un informe de caso reciente documentó una positividad persistente del ctDNA postoperatorio que precedió al diagnóstico de metástasis ováricas bilaterales a pesar de los hallazgos iniciales poco concluyentes en las pruebas de imagen [(11)]. Aunque sugestivo, estas observaciones de un solo caso no pueden dilucidar las características moleculares de la enfermedad metastásica ovárica a nivel de cohorte.

En este estudio, analizamos los perfiles de ctDNA plasmático de pacientes con metástasis ováricas asociadas al CCR utilizando un enfoque basado en el secuenciamiento profundo de perfiles personalizados del cáncer (CAPP-seq). CAPP-seq es una metodología de secuenciación de última generación ultrasensible capaz de detectar variantes derivadas del tumor de baja frecuencia con alta precisión cuantitativa [(12)], [(13)]. La aplicación de CAPP-seq al CCR metastásico ovárico ofrece la oportunidad de caracterizar sistemáticamente la detectabilidad del ctDNA, la carga de mutación y la dinámica clonal longitudinal dentro de este subconjunto metastásico poco común pero clínicamente relevante. Este estudio tuvo como objetivo caracterizar el panorama del ctDNA del cáncer colorrectal asociado a metástasis ováricas utilizando un enfoque de secuenciación basado en plasma.

Materiales y Métodos

Participantes

Inscribimos retrospectivamente a 11 mujeres diagnosticadas con metástasis ováricas del CCR que se sometieron a resección quirúrgica entre julio de 2017 y agosto de 2020 en el Hospital Universitario de Wakayama, Japón. Se obtuvieron muestras de sangre antes de la cirugía. Se obtuvo la aprobación de los comités de ética de la Universidad Médica de Wakayama (número de autorización: 2025) y la Facultad de Medicina de la Universidad de Kindai (número de autorización: 29-066). Se obtuvo el consentimiento informado por escrito de cada participante, y el estudio se adhirió a los principios de la revisión de 2008 de la Declaración de Helsinki.

Extracción de ADN tumoral circulante

Para el aislamiento de ADN libre en plasma (cfDNA), se extrajo sangre periférica (8,5 mL) en tubos de recolección de sangre para cfDNA (Roche Diagnostics, Indianápolis, IN, EE. UU.). De cada muestra, se procesaron 4 mL de plasma con el kit de aislamiento de cfDNA AVENIO (Roche Diagnostics) según el protocolo del fabricante, y el ctDNA se eluyó en 65 μL de tampón de elución. La concentración y la calidad del ctDNA extraído se verificaron utilizando el kit de ensayo de dsDNA PicoGreen (Life Technologies, Carlsbad, CA, EE. UU.) según el protocolo del fabricante. La masa de ADN medida en nanogramos se convirtió a equivalentes genómicos, asumiendo que un genoma haploide humano corresponde a 3,3 pg de ADN (aproximadamente 303 equivalentes genómicos por ng), como se recomienda en la documentación del fabricante y se aplica comúnmente en estudios clínicos de cfDNA. Las muestras se almacenaron a −80 °C hasta su uso.

Secuenciación de ADN tumoral circulante

CAPP-seq se realizó en 10-50 ng de ctDNA utilizando el kit de vigilancia de ctDNA AVENIO, que tiene como objetivo 197 genes (Roche Diagnostics), como se describió anteriormente [(14)], [(15)]. Las bibliotecas purificadas se agruparon y se secuenciaron en un sistema Illumina NextSeq 500 con un kit de alto rendimiento de 300 ciclos (Illumina, San Diego, CA, EE. UU.). La llamada de variantes utilizó el software de análisis de ctDNA AVENIO (Roche Diagnostics), que integra la canalización CAPP-seq [(12)] y la supresión de errores digitales [(13)]. Las variantes encontradas con una frecuencia ≥1% en el Consorcio de Agregación de Exomas se eliminaron, y solo se informaron las variantes de nucleótido único no sinónimas, las inserciones/deleciones, las alteraciones del número de copias y las fusiones de genes relacionadas con los 197 genes. La carga de mutación tumoral sanguínea (bTMB) se determinó como el número de mutaciones no sinónimas por megabase.

Inmunohistoquímica

Los bloques de tejido incluidos en parafina se cortaron en secciones de 3 μm de espesor, después de lo cual las secciones se desparafinaron y se rehidrataron. Luego, los epítopos se recuperaron mediante la recuperación de antígenos inducida por calor: se hirvieron las secciones en una olla a presión en un tampón de citrato (10 mM de citrato de sodio, 0,05% de Tween 20, pH 6,0) durante 20 minutos. El anticuerpo monoclonal DO-7 contra p53 utilizado para la evaluación inmunohistoquímica de p53 en el carcinoma ovárico [(16)] sirvió como anticuerpo primario (1:100). Luego, las secciones se incubaron con un anticuerpo secundario anti-ratón conjugado con peroxidasa de rábano picante (Histofine; Nichirei Biosciences, Tokio, Japón). Las señales se detectaron utilizando un kit de sustrato de diaminobencidina (Nichirei Biosciences). Todas las diapositivas fueron evaluadas de forma independiente por patólogos experimentados que desconocían los resultados del ctDNA.

Análisis estadístico

Los análisis estadísticos se realizaron utilizando el software Prism (GraphPad Software, versión 10.6.1; San Diego, CA, EE. UU.). La correlación entre la concentración de cfDNA y la bTMB se evaluó utilizando el coeficiente de correlación de rango de Spearman, con valores de p < 0,05 considerados estadísticamente significativos.

Participantes

Inscribimos retrospectivamente a 11 mujeres diagnosticadas con metástasis ováricas del CCR que se sometieron a resección quirúrgica entre julio de 2017 y agosto de 2020 en el Hospital Universitario de Wakayama, Japón. Se obtuvieron muestras de sangre antes de la cirugía. Se obtuvo la aprobación de los comités de ética de la Universidad Médica de Wakayama (número de autorización: 2025) y la Facultad de Medicina de la Universidad de Kindai (número de autorización: 29-066). Se obtuvo el consentimiento informado por escrito de cada participante, y el estudio se adhirió a los principios de la revisión de 2008 de la Declaración de Helsinki.

Extracción de ADN tumoral circulante

Para el aislamiento de ADN libre en plasma (cfDNA), se extrajo sangre periférica (8,5 mL) en tubos de recolección de sangre para cfDNA (Roche Diagnostics, Indianápolis, IN, EE. UU.). De cada muestra, se procesaron 4 mL de plasma con el kit de aislamiento de cfDNA AVENIO (Roche Diagnostics) según el protocolo del fabricante, y el ctDNA se eluyó en 65 μL de tampón de elución. La concentración y la calidad del ctDNA extraído se verificaron utilizando el kit de ensayo de dsDNA PicoGreen (Life Technologies, Carlsbad, CA, EE. UU.) según el protocolo del fabricante. La masa de ADN medida en nanogramos se convirtió a equivalentes genómicos, asumiendo que un genoma haploide humano corresponde a 3,3 pg de ADN (aproximadamente 303 equivalentes genómicos por ng), como se recomienda en la documentación del fabricante y se aplica comúnmente en estudios clínicos de cfDNA. Las muestras se almacenaron a −80 °C hasta su uso.

Secuenciación de ADN tumoral circulante

CAPP-seq se realizó en 10-50 ng de ctDNA utilizando el kit de vigilancia de ctDNA AVENIO, que tiene como objetivo 197 genes (Roche Diagnostics), como se describió anteriormente [(14)], [(15)]. Las bibliotecas purificadas se agruparon y se secuenciaron en un sistema Illumina NextSeq 500 con un kit de alto rendimiento de 300 ciclos (Illumina, San Diego, CA, EE. UU.). La llamada de variantes utilizó el software de análisis de ctDNA AVENIO (Roche Diagnostics), que integra la canalización CAPP-seq [(12)] y la supresión de errores digitales [(13)]. Las variantes encontradas con una frecuencia ≥1% en el Consorcio de Agregación de Exomas se eliminaron, y solo se informaron las variantes de nucleótido único no sinónimas, las inserciones/deleciones, las alteraciones del número de copias y las fusiones de genes relacionadas con los 197 genes. La carga de mutación tumoral sanguínea (bTMB) se determinó como el número de mutaciones no sinónimas por megabase.

Inmunohistoquímica

Los bloques de tejido incluidos en parafina se cortaron en secciones de 3 μm de espesor, después de lo cual las secciones se desparafinaron y se rehidrataron. Luego, los epítopos se recuperaron mediante la recuperación de antígenos inducida por calor: se hirvieron las secciones en una olla a presión en un tampón de citrato (10 mM de citrato de sodio, 0,05% de Tween 20, pH 6,0) durante 20 minutos. El anticuerpo monoclonal DO-7 contra p53 utilizado para la evaluación inmunohistoquímica de p53 en el carcinoma ovárico [(16)] sirvió como anticuerpo primario (1:100). Luego, las secciones se incubaron con un anticuerpo secundario anti-ratón conjugado con peroxidasa de rábano picante (Histofine; Nichirei Biosciences, Tokio, Japón). Las señales se detectaron utilizando un kit de sustrato de diaminobencidina (Nichirei Biosciences). Todas las diapositivas fueron evaluadas de forma independiente por patólogos experimentados que desconocían los resultados del ctDNA.

Análisis estadístico

Los análisis estadísticos se realizaron utilizando el software Prism (GraphPad Software, versión 10.6.1; San Diego, CA, EE. UU.). La correlación entre la concentración de cfDNA y la bTMB se evaluó utilizando el coeficiente de correlación de rango de Spearman, con valores de p < 0,05 considerados estadísticamente significativos.

Resultados

Niveles de cfDNA y bTMB pretratamiento

Estudiamos retrospectivamente a 11 mujeres con metástasis ováricas asociadas al cáncer colorrectal (edad media, 50 años [rango, 38-72]; índice de masa corporal medio, 21,9 kg/m2 [rango, 20,0-29,5]). Evaluamos la concentración de cfDNA y la bTMB en muestras de plasma pretratamiento (Figura 1). La concentración de cfDNA media fue de 2999,9 copias/mL (rango, 1822,1-18789,9), y la bTMB media fue de 15,2 mutaciones/Mb (rango, 5,0-70,7). El análisis de correlación de rango de Spearman mostró una asociación moderada pero no significativa entre la concentración de cfDNA y la bTMB (ρ = 0,52, p = 0,10). En un análisis de sensibilidad que excluyó el caso OVO-104, que presentaba un valor de cfDNA atípico, la asociación se fortaleció y alcanzó significación estadística (ρ = 0,67, p = 0,034).

Perfil genómico integral de las metástasis ováricas asociadas al CCR mediante CAPP-seq

A continuación, realizamos un perfil genómico exhaustivo del ADN tumoral circulante en muestras de plasma pretratamiento de pacientes con metástasis ováricas asociadas al CCRC, utilizando un panel CAPP-seq de 197 genes. El panel CAPP-seq de 197 genes utilizado en este estudio no incluía genes asociados a la hematopoyesis clonal de potencial indeterminado (CHIP). Se muestra en la Figura 2 un conjunto completo de las alteraciones identificadas, que abarca mutaciones patógenas y amplificación génica. En general, 9 de 11 pacientes (82%) presentaban ≥1 mutación somática patógena no sinónima, con mayor frecuencia en TP53 [8/11 (73%)], KRAS [6/11 (55%)] y APC [5/11 (45%)], lo cual concordaba con la base de datos The Cancer Genome Atlas (TCGA) [(17)]. También detectamos una amplificación del número de copias somáticas en tres genes, EGFR, MET y ERBB2, en el ctDNA plasmático utilizando CAPP-seq. Las amplificaciones del número de copias de EGFR se observaron en cuatro pacientes (36%), las amplificaciones del número de copias de MET se observaron en dos pacientes (18%) y las amplificaciones del número de copias de ERBB2 se observaron en dos pacientes (18%).

Concordancia de las mutaciones de TP53 entre el ctDNA y la inmunohistoquímica de tejido

Dado que la inmunohistoquímica de p53 (IHC) se ha utilizado como sustituto del estado mutacional de TP53 en el CCRC [(18)], [(19)], evaluamos la concordancia entre los patrones de expresión de la IHC de p53 y las alteraciones del gen TP53 en esta cohorte (Tabla 1). La concordancia general entre los patrones de la IHC de p53 y el estado de mutación de TP53 fue del 90,9% (10/11) (Tabla 2). Aunque el tamaño de la muestra fue limitado, cuando la mutación de TP53 detectada en el ctDNA se utilizó como referencia, la inmunohistoquímica de p53 logró una sensibilidad del 100% (intervalo de confianza [IC] del 95%, 63,1%-100%) y una especificidad del 66,7% (IC del 95%, 9,4%-99,2%). Estos hallazgos sugieren que el análisis basado en ctDNA puede proporcionar un enfoque fiable y factible clínicamente para detectar las mutaciones de TP53 y podría servir como una herramienta práctica para la caracterización molecular, especialmente cuando el acceso al tejido es limitado.

Niveles de cfDNA y bTMB en el pretratamiento

Estudiamos retrospectivamente a 11 mujeres con metástasis ováricas asociadas al cáncer colorrectal (edad media, 50 años [rango, 38-72]; índice de masa corporal medio, 21,9 kg/m² [rango, 20,0-29,5]). Evaluamos la concentración de cfDNA y el bTMB en muestras de plasma pretratamiento (Figura 1). La concentración media de cfDNA fue de 2999,9 copias/mL (rango, 1822,1-18789,9) y el bTMB medio fue de 15,2 mutaciones/Mb (rango, 5,0-70,7). El análisis de correlación de Spearman mostró una asociación moderada, pero no significativa, entre la concentración de cfDNA y el bTMB (ρ = 0,52, p = 0,10). En un análisis de sensibilidad que excluyó el caso OVO-104, que presentaba un valor atípico de cfDNA, la asociación se fortaleció y alcanzó significación estadística (ρ = 0,67, p = 0,034).

Perfil genómico exhaustivo de las metástasis ováricas asociadas al CCRC utilizando CAPP-seq

A continuación, realizamos un perfil genómico exhaustivo del ADN tumoral circulante en muestras de plasma pretratamiento de pacientes con metástasis ováricas asociadas al CCRC, utilizando un panel CAPP-seq de 197 genes. El panel CAPP-seq de 197 genes utilizado en este estudio no incluía genes asociados a la hematopoyesis clonal de potencial indeterminado (CHIP). Se muestra en la Figura 2 un conjunto completo de las alteraciones identificadas, que abarca mutaciones patógenas y amplificación génica. En general, 9 de 11 pacientes (82%) presentaban ≥1 mutación somática patógena no sinónima, con mayor frecuencia en TP53 [8/11 (73%)], KRAS [6/11 (55%)] y APC [5/11 (45%)], lo cual concordaba con la base de datos The Cancer Genome Atlas (TCGA) [(17)]. También detectamos una amplificación del número de copias somáticas en tres genes, EGFR, MET y ERBB2, en el ctDNA plasmático utilizando CAPP-seq. Las amplificaciones del número de copias de EGFR se observaron en cuatro pacientes (36%), las amplificaciones del número de copias de MET se observaron en dos pacientes (18%) y las amplificaciones del número de copias de ERBB2 se observaron en dos pacientes (18%).

Concordancia de las mutaciones de TP53 entre el ctDNA y la inmunohistoquímica de tejido

Dado que la inmunohistoquímica de p53 (IHC) se ha utilizado como sustituto del estado mutacional de TP53 en el CCRC [(18)], [(19)], evaluamos la concordancia entre los patrones de expresión de la IHC de p53 y las alteraciones del gen TP53 en esta cohorte (Tabla 1). La concordancia general entre los patrones de la IHC de p53 y el estado de mutación de TP53 fue del 90,9% (10/11) (Tabla 2). Aunque el tamaño de la muestra fue limitado, cuando la mutación de TP53 detectada en el ctDNA se utilizó como referencia, la inmunohistoquímica de p53 logró una sensibilidad del 100% (intervalo de confianza [IC] del 95%, 63,1%-100%) y una especificidad del 66,7% (IC del 95%, 9,4%-99,2%). Estos hallazgos sugieren que el análisis basado en ctDNA puede proporcionar un enfoque fiable y factible clínicamente para detectar las mutaciones de TP53 y podría servir como una herramienta práctica para la caracterización molecular, especialmente cuando el acceso al tejido es limitado.

Discusión

Este estudio proporciona una caracterización molecular de las metástasis ováricas asociadas al CCRC utilizando el análisis de ADN tumoral circulante (ctDNA) basado en CAPP-seq. Las metástasis ováricas del CCRC son poco frecuentes, pero se asocian constantemente con un mal pronóstico y desafíos terapéuticos [(2)], [(3)]. Aunque algunos pacientes pueden beneficiarse de la metastectomía [(4)], [(5)], las lesiones ováricas a menudo progresan a pesar del aparente control sistémico de la enfermedad [(1)]. Este comportamiento discordante a menudo se ha atribuido a factores farmacocinéticos; sin embargo, la evidencia acumulada sugiere que los microambientes específicos de cada órgano influyen en la selección clonal y la evolución metastásica a través de las interacciones de "semilla y suelo" [(20)], [(21)]. El estroma ovárico, caracterizado por una arquitectura tisular sensible a las hormonas y un remodelado vascular dinámico, puede imponer limitaciones ecológicas distintas a los nichos metastásicos hepáticos o pulmonares. En este contexto, una interrogación molecular sensible es esencial para dilucidar la complejidad subclonal y los procesos evolutivos adaptativos.

CAPP-seq es una plataforma de secuenciación profunda, informada por el tumor y ultrasensible, que se desarrolló originalmente para detectar alteraciones de ADN tumoral circulante de baja frecuencia en tumores sólidos [(12)]. Las mejoras posteriores han mejorado la supresión del error de fondo y han ampliado la aplicabilidad clínica [(13)]. Previamente demostramos la viabilidad del perfilado de ctDNA basado en CAPP-seq en neoplasias ginecológicas, incluido el cáncer de ovario [(14)], [(15)], y posteriormente extendimos este enfoque a las metástasis ováricas asociadas al CCRC. En paralelo, las estrategias de secuenciación profunda basadas en plasma se han validado en el CCRC, particularmente para la detección de enfermedad residual mínima y el seguimiento de la recurrencia [(7)], [(8)], [(9)], [(10)], [(22)]. En conjunto, estos estudios establecen la validez analítica del perfilado de ctDNA de alta sensibilidad en el CCRC y proporcionan la base para su aplicación a fenotipos metastásicos poco comunes. En la cohorte actual, se detectaron mutaciones "driver" del CCRC, como TP53, KRAS y APC, a frecuencias comparables a las notificadas en el conjunto de datos de TCGA de cáncer de colon y recto [(22)]. En TCGA, las alteraciones de APC se producen en aproximadamente el 75% de los casos, las mutaciones de TP53 en el 60% y las mutaciones de KRAS en el 40%, lo que define la arquitectura genómica central de la tumorigénesis colorrectal. La concordancia de nuestros hallazgos con estos datos genómicos a gran escala apoya la continuidad de la línea entre los tumores colorrectales primarios y las metástasis ováricas y argumenta en contra de la aparición de un subtipo molecular ovárico distinto. En cambio, las metástasis ováricas parecen retener la base genómica canónica del CCRC, al tiempo que potencialmente adquieren alteraciones adicionales durante la progresión metastásica.

Nuestros datos demuestran además que el perfil genómico basado en plasma es biológicamente informativo en este subconjunto metastásico poco común. Las alteraciones derivadas del tumor detectables en la mayoría de los pacientes indican una liberación activa de ctDNA de las lesiones ováricas, lo que cuestiona la suposición de que los compartimentos similares a un "santuario" contribuyen mínimamente al ADN tumoral circulante. Coherente con la evidencia previa de que el ctDNA refleja la carga tumoral metastásica en las neoplasias avanzadas [(23)], las metástasis ováricas parecen capaces de liberar ADN tumoral medible en la circulación sistémica, lo que permite una interrogación genómica no invasiva cuando el acceso al tejido es limitado. Más allá de la detectabilidad, el perfilado de ctDNA proporciona información sobre la arquitectura clonal y la evolución metastásica. La coexistencia de mutaciones "driver" colorrectales canónicas con la amplificación recurrente de genes de receptores de factores de crecimiento, incluidos EGFR, MET y ERBB2, es coherente con un modelo evolutivo ramificado de diseminación metastásica [(24)]. La amplificación de las quinasas receptoras de tirosina se ha relacionado con una mayor señalización proliferativa y mecanismos de resistencia en el CCRC metastásico [(25)], [(26)]. En particular, la amplificación de ERBB2 (HER2) se ha vuelto clínicamente relevante con el desarrollo de estrategias terapéuticas dirigidas a HER2 en el CCRC metastásico con RAS silvestre, incluido el bloqueo dual de HER2 y los conjugados anticuerpo-fármaco, como el trastuzumab deruxtecan [(27)], [(28)], lo que subraya la relevancia traslacional del perfil genómico exhaustivo. Bajo las presiones selectivas impuestas por la terapia sistémica y el microambiente ovárico, las poblaciones sublonales que albergan vías de señalización amplificadas pueden expandirse preferentemente, lo que facilita la persistencia tumoral. El seguimiento longitudinal del ctDNA será, por lo tanto, importante para determinar si estas alteraciones representan características genómicas estables o eventos adaptativos dinámicos que surgen durante el tratamiento.

Se deben reconocer varias limitaciones. La rareza del CCRC con metástasis ováricas limitó el tamaño de la cohorte y la potencia estadística, lo que restringió las conclusiones definitivas con respecto al enriquecimiento de las alteraciones y la generalizabilidad. El secuenciamiento de tejido pareado no estuvo disponible de manera uniforme, lo que impidió la evaluación directa de la concordancia y las relaciones filogenéticas entre las lesiones primarias y metastásicas utilizando los mismos paneles de genes. Aunque el panel de genes no se dirigió principalmente a los genes comunes asociados a la hematopoyesis clonal de potencial indeterminado (CHIP), la ausencia de controles de leucocitos limitó la exclusión completa de variantes no tumorales raras. No obstante, este trabajo representa un esfuerzo inicial para definir el panorama del ctDNA del CCRC con metástasis ováricas utilizando una plataforma de secuenciación profunda clínicamente aplicable.

En conclusión, el CCRC con metástasis ováricas retiene las mutaciones "driver" canónicas del cáncer colorrectal, al tiempo que presenta amplificaciones recurrentes de quinasas receptoras de tirosina que pueden reflejar la evolución clonal adaptativa dentro del microambiente ovárico. El perfilado de ctDNA basado en CAPP-seq proporciona una estrategia factible e informativa para la caracterización molecular de este fenotipo metastásico poco común y puede contribuir a una mejor comprensión de la biología tumoral específica del sitio y la toma de decisiones terapéuticas.

Información del artículo

Agradecimientos

Este artículo se basa en el estudio, que recibió el Premio de Incentivo a la Investigación Médica de la Asociación Médica de Japón en 2025.

Contribuciones de los autores

Conceptualización: Naoyuki Iwahashi, Kazuto Nishio y Kazuhiko Ino. Metodología: Tomoko Noguchi y Kazuko Sakai. Análisis formal: Naoyuki Iwahashi. Investigación: Naoyuki Iwahashi y Tomoko Noguchi. Recursos: Tamaki Yahata, Kumiko Nakata, Kaho Nishioka, Megumi Fujino, Shinichiro Takeda y Nobuhiko Suzuki. Curación de datos: Naoyuki Iwahashi. Redacción: borrador original: Naoyuki Iwahashi. Redacción: revisión y edición: Kazuko Sakai, Kazuto Nishio y Kazuhiko Ino. Visualización: Naoyuki Iwahashi y Tomoko Noguchi. Supervisión: Kazuto Nishio y Kazuhiko Ino. Administración del proyecto: Naoyuki Iwahashi. Adquisición de financiación: Naoyuki Iwahashi y Kazuhiko Ino. Todos los autores han leído y aceptado la versión publicada del manuscrito.

Conflictos de intereses

Ninguno

Código de aprobación del IRB y nombre de la institución

La aprobación fue otorgada por los comités de ética de la Universidad de Medicina de Wakayama (número de autorización: 2026) y la Facultad de Medicina de la Universidad de Kindai (número de autorización: 29-066).

Agradecimientos

Este artículo se basa en el estudio, que recibió el Premio al Fomento de la Investigación Médica de la Asociación Médica de Japón en 2025.

Contribuciones de los autores

Conceptualización: Naoyuki Iwahashi, Kazuto Nishio y Kazuhiko Ino. Metodología: Tomoko Noguchi y Kazuko Sakai. Análisis formal: Naoyuki Iwahashi. Investigación: Naoyuki Iwahashi y Tomoko Noguchi. Recursos: Tamaki Yahata, Kumiko Nakata, Kaho Nishioka, Megumi Fujino, Shinichiro Takeda y Nobuhiko Suzuki. Curación de datos: Naoyuki Iwahashi. Redacción: preparación del borrador original: Naoyuki Iwahashi. Redacción: revisión y edición: Kazuko Sakai, Kazuto Nishio y Kazuhiko Ino. Visualización: Naoyuki Iwahashi y Tomoko Noguchi. Supervisión: Kazuto Nishio y Kazuhiko Ino. Administración del proyecto: Naoyuki Iwahashi. Obtención de financiación: Naoyuki Iwahashi y Kazuhiko Ino. Todos los autores han leído y aceptado la versión publicada del manuscrito.

Conflictos de intereses

Ninguno

Código de aprobación del IRB y nombre de la institución

Se obtuvo la aprobación de los comités de ética de la Universidad de Medicina de Wakayama (número de autorización: 2026) y la Facultad de Medicina de la Universidad de Kindai (número de autorización: 29-066).