Cetuximab (CET), un anticuerpo monoclonal dirigido al receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), constituye una opción terapéutica fundamental para el cáncer colorrectal avanzado (CCR).
Sin embargo, los pacientes con CCR con mutación en KRAS presentan una resistencia intrínseca a CET, lo que compromete directamente su eficacia clínica y sus beneficios terapéuticos. Zuojin Wan (ZJW), una fórmula clásica de la medicina tradicional china que consiste en Coptis chinensis Franch. y Evodia rutaecarpa (Juss.) Benth., ha demostrado ejercer una potente actividad antitumoral; no obstante, su posible función para revertir la resistencia a CET en el CCR con mutación en KRAS y los mecanismos moleculares subyacentes siguen estando poco definidos. El objetivo de este estudio fue investigar la eficacia de ZJW para superar la resistencia a CET en el CCR con mutación en KRAS y caracterizar además sus principales dianas moleculares y mecanismos reguladores. Se llevaron a cabo experimentos in vitro utilizando dos líneas celulares de CCR con mutación en KRAS, HCT116 y SW620.
Se evaluó el efecto antiproliferativo sinérgico de ZJW en combinación con CET mediante el ensayo CCK-8 y el ensayo de formación de colonias. Se verificó la inducción de la ferroptosis mediada por el tratamiento combinado mediante la medición de la peroxidación lipídica, el agotamiento del glutatión (GSH), la acumulación de iones ferrosos (Fe2+) y la observación de alteraciones morfológicas mitocondriales características mediante microscopía electrónica de transmisión (MET). Se detectaron los niveles de especies reactivas del oxígeno (ROS) para evaluar el estrés oxidativo intracelular. Se realizó una secuenciación del transcriptoma, un análisis de Western blot y un ensayo inmunoenzimático (ELISA) para explorar los mecanismos moleculares subyacentes, mientras que se llevó a cabo una transfección con plásmidos y una reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR) para la validación funcional.
Se estableció un modelo de xenoinjerto subcutáneo en ratones desnudos para evaluar la eficacia antitumoral del tratamiento combinado in vivo, y se realizó una tinción inmunohistoquímica (IHQ) para detectar la expresión de las proteínas relevantes. Los componentes bioactivos primarios de ZJW se identificaron mediante espectrometría de masas, y se realizó un análisis de farmacología de redes para predecir las posibles interacciones entre estos componentes activos y las vías de señalización relacionadas con el CCR. ZJW potenció sinérgicamente la supresión mediada por CET de la proliferación de las células de CCR con mutación en KRAS y desencadenó una ferroptosis significativa, como lo demuestra el aumento de la peroxidación lipídica, la reducción de los niveles de GSH, el aumento de la acumulación de Fe2+, la contracción de las mitocondrias con crestas condensadas y el aumento notable del estrés oxidativo intracelular. El tratamiento combinado con ZJW y CET redujo significativamente la expresión de las proteínas centrales implicadas en los ejes antioxidantes paralelos NRF2-GCH1/CoQ y DHODH/CoQ, alterando así la homeostasis redox intracelular.
El silenciamiento de NRF2 o DHODH facilitó la ferroptosis y sensibilizó las células de CCR a CET, mientras que la sobreexpresión de estas dos moléculas abolió el efecto antitumoral sinérgico de ZJW más CET. En el modelo de xenoinjerto en ratones desnudos, el régimen combinado suprimió notablemente el crecimiento tumoral y disminuyó el peso tumoral, y moduló la expresión de los marcadores asociados a la ferroptosis (NRF2, DHODH) y el indicador de peroxidación lipídica 4-HNE en los tejidos tumorales. La espectrometría de masas identificó los principales componentes bioactivos de ZJW, y el análisis de farmacología de redes predijo su posible participación en múltiples vías relacionadas con el CCR, incluida la defensa antioxidante y la regulación de la ferroptosis. ZJW revierte la resistencia a CET en el CCR con mutación en KRAS al inhibir los ejes antioxidantes paralelos NRF2-GCH1/CoQ y DHODH/CoQ para inducir la ferroptosis.
Este estudio proporciona una base científica sólida para la traslación clínica de ZJW como una estrategia terapéutica adyuvante para mejorar la eficacia de CET en el tratamiento del CCR.
Inicia sesión o regístrate para acceder al texto completo
¡Aún no hay comentarios. Sé el primero en comentar!