La metástasis hepática del cáncer colorrectal (CCR) es una de las principales causas de mortalidad relacionada con el cáncer. La aparición de metástasis hepática del cáncer colorrectal (CRL) está estrechamente asociada con la evasión inmune tumoral, a través de la cual las células cancerosas evaden la vigilancia inmune mediante múltiples mecanismos, lo que promueve la diseminación metastásica. Las proteínas de unión al ARN (RBPs) desempeñan funciones cruciales en la regulación de la expresión génica. El antígeno ventral neuro-oncológico 1 (NOVA1), una RBP importante, a menudo está desregulado en la progresión del cáncer.
El presente estudio tuvo como objetivo investigar los mecanismos moleculares subyacentes al papel de NOVA1 en la CRL. Los niveles de expresión de NOVA1 y NRXN1 en los tejidos y líneas celulares de CCR se detectaron mediante reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (RT-qPCR) y Western blot. Se evaluó la proliferación, migración e invasión celular utilizando el kit de recuento celular-8 (CCK-8), ensayos de formación de colonias, ensayos de Transwell y ensayos de curación de heridas. Se utilizó citometría de flujo para analizar la apoptosis de las células de CCR.
Posteriormente, las células de CCR se cultivaron en co-cultivo con células T CD8+. Se utilizaron citometría de flujo, ensayo inmunoenzimático (ELISA) y ensayo de liberación de lactato deshidrogenasa (LDH) para medir la proliferación de las células T CD8+, la apoptosis, la secreción de citocinas (factor de necrosis tumoral-α [TNF-α] e interferón-γ [IFN-γ]) y la actividad citotóxica. Se realizaron inmunoprecipitación de ARN (RIP), ensayo de extracción de ARN y ensayos de actinomicina D para verificar la unión de NOVA1 al ARNm de NRXN1 y su efecto regulador sobre la estabilidad del ARNm. Se realizó una validación in vivo utilizando un modelo de metástasis hepática en ratón.
La metástasis hepática se observó y se monitorizó mediante imagenología en vivo, y los focos metastásicos hepáticos se cuantificaron mediante tinción con hematoxilina y eosina (H&E). La expresión de Ki-67, CD8 y ligando de muerte programada 1 (PD-L1) en los tejidos tumorales se detectó mediante inmunohistoquímica (IHC) e inmunofluorescencia (IF). La expresión de NOVA1 se redujo en los tejidos y líneas celulares de CCR. Los ensayos funcionales demostraron que la sobreexpresión de NOVA1 inhibió la proliferación de las células de CCR (la formación de colonias se redujo en aproximadamente un 50%), la migración (las células migradas se redujeron en aproximadamente un 40%) y la evasión inmune (la proliferación de las células T CD8+ aumentó en aproximadamente un 45%) in vitro, mientras que la inhibición de NOVA1 promovió estos procesos.
Los ensayos de RIP y de estabilidad del ARNm revelaron que NOVA1 se une al ARNm de NRXN1 (un enriquecimiento de 5,16 veces en comparación con IgG) y mejora su estabilidad (un aumento del 30% en relación con el grupo LV-NC), lo que aumenta la expresión de NRXN1. Los experimentos de rescate mostraron que la inhibición de NRXN1 revirtió los efectos inhibitorios de la sobreexpresión de NOVA1 sobre la evasión inmune de las células de CCR (evidenciado por una disminución del 55% en la proliferación de las células T CD8+) y la progresión maligna (la formación de colonias y las células migradas aumentaron en aproximadamente un 40%-50%). Los experimentos in vivo confirmaron que, en comparación con el grupo de control, la sobreexpresión de NOVA1 redujo el número de focos metastásicos hepáticos en un 50%; disminuyó los porcentajes de células Ki-67 positivas y PD-L1 positivas en un 40% y un 30%, respectivamente; y aumentó la infiltración de células T CD8+ en un 65%. Por el contrario, la inhibición de NRXN1 aumentó los focos metastásicos hepáticos en un 30%; aumentó los porcentajes de células Ki-67 positivas y PD-L1 positivas en un 40% y un 30%, respectivamente; y redujo la infiltración de células T CD8+ en un 45%.
NOVA1 influye en la evasión inmune, la proliferación y la migración de las células de CCR al unirse directamente al ARNm de NRXN1 y regular su estabilidad del ARNm.
El presente estudio revela el papel regulador clave del eje NOVA1-NRXN1 en la CRL, lo que sugiere que este eje puede servir como un posible objetivo terapéutico y un biomarcador pronóstico. Dirigirse a la vía de señalización NOVA1-NRXN1 puede proporcionar una nueva estrategia para la intervención clínica en la CRL.
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