La proteína mutante BRAF V600E es un biomarcador valioso para el diagnóstico y pronóstico del cáncer colorrectal. La detección cuantitativa mediante espectrometría de masas (MS) requiere la purificación desde extractos celulares complejos y la digestión en péptidos sustitutos, un proceso que tradicionalmente lleva al menos ?12 h, lo cual es tiempo-consuming y laborioso, limitando su aplicabilidad clínica. Presentamos una tarjeta de preparación de muestras microfluídica automatizada que integra inmunoprecipitación, lavado multietapas y digestión tricinica en la partícula mediante la integración de micromezcladores impulsados por aire, microválvulas y partículas guiadas magnéticamente. Se empleó la digestión en la partícula para eliminar los múltiples pasos de intercambio de buffer, simplificando el control fluídico y produciendo más péptidos BRAF que la rutina de trabajo de elución-digestión convencional, en la cual solo se recuperan aproximadamente ?50 % de las proteínas capturadas.
Partiendo de un lisado celular clarificado, el dispositivo produce muestras de péptidos dentro de aproximadamente 2,5-3 h. Aunque los componentes individuales del flujo de trabajo han sido reportados previamente, la plataforma actual únicamente logra una integración y automatización end-to-end de la preparación de muestras inmuno-MS. Este trabajo enfatiza la simplicidad operativa y el tiempo de vuelta rápido, proporcionando una solución práctica para el análisis basado en MS de proteínas mutantes en aplicaciones de medicina traslacional y precisa.
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