Diseño, síntesis y estudio mecanístico de una estructura de fenilpirazolopirimidinona basada en moléculas pequeñas bispecíficas como terapia dual dirigida a VEGFR y al punto de control inmunitario PD-L1 en el carcinoma hepatocelular.

En este estudio, se sintetizó una nueva serie de N-arilmetileno/heterilmetileno-2-(4-oxo-1-fenil-1,4-dihidro-5H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-5-il)acetohidrazida 8a-l mediante la reacción de condensación de acetohidrazida 6 con varios aldehídos aromáticos 7a-l. Se evaluó la actividad citotóxica de estos compuestos in vitro contra tres líneas celulares de cáncer humano: carcinoma hepatocelular (HepG2), cáncer de próstata (PC-3) y carcinoma colorrectal (HCT-116). Entre la serie sintetizada, el compuesto 8g exhibió la mayor potencia, con valores de IC50 de 3,93 µM, 9,56 µM y 6,30 µM contra HepG2, PC-3 y HCT-116, respectivamente, superando a los fármacos de referencia doxorrubicina (4,50 µM contra HepG2) y sorafenib (9,18 µM contra HepG2). Mecánicamente, 8g demostró una fuerte inhibición de VEGFR2 (IC50 = 0,38 µM), pero superó la inhibición de PD-L1 en comparación con Bavencio (IC50 = 134,41 pg/mL y 217,74 pg/mL, respectivamente).

En cambio, aumentó la secreción de INF-γ en comparación con el fármaco de referencia. El análisis del ciclo celular reveló un arresto en G0/G1 con inducción de apoptosis del 29,41%. El ensayo de enzimas apoptóticas mostró una sobreexpresión de BAX y Caspasa-3, y una disminución de Bcl-2, lo que confirmó la activación de la vía apoptótica intrínseca. El acoplamiento molecular in silico y la simulación dinámica respaldaron los datos, que se correlacionaron fuertemente con el enfoque experimental, y demostraron que el compuesto 8g ejerce una actividad antitumoral multi-dirigida a través de la inhibición de VEGFR2 y PD-L1.

En conclusión, 8g es un candidato prometedor recomendado para un mayor desarrollo terapéutico.