El cáncer colorrectal (CCR) sigue siendo uno de los cánceres más comunes y letales en todo el mundo, y la enfermedad metastásica representa la mayor parte de la mortalidad relacionada con el CCR. La inmunoterapia con inhibidores de la proteína de muerte programada (PD)-1/ligando 1 (PD-1/PD-L1) ha demostrado un éxito notable en el tratamiento de cánceres colorrectales metastásicos (CCR) con deficiencia en la reparación de desajustes (dMMR), pero es menos eficaz en cánceres con reparación de desajustes competente (pMMR). Estudios recientes sugieren que la autofagia mejorada puede regular negativamente los efectos de los inhibidores de PD-1/PD-L1 en tumores pMMR.
El presente estudio tiene como objetivo investigar el papel de la autofagia en la reducción de la eficacia de los inhibidores de PD-1/PD-L1 y explorar si la combinación de inhibidores de la autofagia puede mejorar los resultados del tratamiento en el CCR pMMR. Utilizamos CRISPR/Cas9 para eliminar el gen de reparación de desajustes Mlh1 en las células de cáncer colorrectal CT26, generando células CT26-dMMR. Las células CT26-pMMR y CT26-dMMR se trataron con el inhibidor de la autofagia 3-metiladenina (3-MA) y el factor de necrosis tumoral alfa (TnfA) para evaluar la viabilidad celular. Se utilizó citometría de flujo para analizar los efectos de 3-MA y TnfA en el ciclo celular, la apoptosis y las poblaciones de células inmunitarias.
Los niveles de proteínas relacionadas con la regulación del ciclo celular, la apoptosis y la autofagia se midieron mediante inmunoblotting.
Además, se realizaron experimentos in vivo utilizando un modelo de xenoinjerto derivado de una línea celular (CDX) para evaluar los efectos antitumorales de la combinación de 3-MA con el inhibidor de PD-1/PD-L1 BMS-1. Las células CT26-pMMR fueron menos sensibles a TnfA en comparación con las células CT26-dMMR. El tratamiento combinado con 3-MA y TnfA suprimió significativamente el regulador del ciclo celular ciclina D1 y activó la señalización apoptótica a través de niveles elevados de Casp3/Casp3 clivada y Casp9/Casp9 clivada. In vivo, el cotratamiento con 3-MA y BMS-1 inhibió el crecimiento tumoral de forma más eficaz que cualquiera de los dos tratamientos por separado.
En particular, se redujeron las células T reguladoras (Tregs) y aumentaron las células T CD8+, lo que indica una respuesta inmune mejorada. Nuestros hallazgos demuestran que la inhibición de la autofagia mejora la eficacia inmunoterapéutica de los inhibidores de PD-1/PD-L1 en el cáncer colorrectal pMMR.
El presente estudio ofrece una nueva estrategia para superar la resistencia a los inhibidores de PD-1/PD-L1 en el CCR metastásico pMMR mediante la combinación de la inhibición de la autofagia con la inmunoterapia.
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