El cáncer colorrectal (CRC) ocupa el tercer lugar entre los tumores más prevalentes a nivel mundial. KRAS es el oncogen mutado con mayor frecuencia (30-40%) en CRC, lo que ha sido definido como un "objetivo terapéutico indruggable" durante las últimas cuatro décadas. En este estudio, aplicamos cuatro líneas celulares HT-29, a saber, HT-29-wild-type (HT-29-WT), punto mutado HT-29-KRASG12V, HT-29-KRASG12C y HT-29-KRASG12D, con el fin de detectar la eficiencia del inhibidor RAF-MEK VS6766, se seleccionó el inhibidor BRAFV600E PLX4720 como control. Se realizaron análisis de citotoxicidad in vitro, ciclo celular y apoptosis en líneas celulares HT-29 después del tratamiento con VS6766 solo o combinado con 5-Fluorouracil (5-FU)/MK2206 mediante el Kit de Conteo Celular CCK-8 (CCK-8), formación de colonias y análisis por citometría de flujo, respectivamente.
Los cambios en la expresión de proteínas se confirmaron mediante western blot. El tratamiento con VS6766 inhibió la proliferación de todas las cuatro líneas celulares HT29, mientras que PLX4720 tuvo un efecto inhibitorio modesto. VS6766 indujo el arresto en fase G1 así como apoptosis celular, acompañado por la downregulación de p-ERK y p-MEK.
Además, VS6766 y 5-FU suprimieron sintéticamente el crecimiento de las células HT-29. Al mismo tiempo, p-AKT se upreguló después del tratamiento con VS6766. El inhibidor de AKT MK2206 y VS6766 mostraron un efecto sinérgico en todas las cuatro líneas celulares. En conjunto, este estudio proporciona la primera evidencia experimental que demuestra que todas las líneas celulares G12 mutadas son sensibles al VS6766 aplicado tanto solo como combinado con 5-FU o inhibidor de AKT.
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