Panorama molecular y tecnologías de diagnóstico avanzadas para las mutaciones de BRAF en el cáncer: desde la PCR cuantitativa y la ddPCR hasta las plataformas basadas en CRISPR.

Las mutaciones de BRAF son alteraciones oncogénicas clave en múltiples tipos de cáncer, incluidos el melanoma, el carcinoma de tiroides, el cáncer colorrectal, el cáncer de pulmón de células no pequeñas, el glioma y la leucemia de células pilosas. El variante más prevalente, BRAF-V600E, induce la activación constitutiva de la vía de señalización MAPK, lo que promueve la progresión tumoral e influye en la respuesta terapéutica.

Por lo tanto, la detección precisa de las alteraciones de BRAF es esencial para la clasificación molecular, la evaluación pronóstica, la selección del tratamiento y la vigilancia de la resistencia. Esta revisión resume la heterogeneidad molecular de las mutaciones de BRAF y evalúa críticamente las metodologías diagnósticas actuales. Se comparan los enfoques convencionales, como la PCR específica de alelos y la secuenciación de Sanger, con plataformas cuantitativas avanzadas, que incluyen el análisis de fusión de alta resolución, la PCR digital por gotas y la secuenciación de nueva generación, con énfasis en la sensibilidad analítica, la cobertura de mutaciones y la aplicabilidad clínica. También se analizan las tecnologías emergentes, como los ensayos basados en CRISPR, los sistemas de amplificación por círculo rodante y los biosensores y plataformas de diagnóstico en el punto de atención basados en nanopartículas, por su potencial para mejorar la detección ultrasensible, particularmente en entornos de biopsia líquida.

Estas herramientas emergentes se destacan por su potencial para permitir la detección de mutaciones ultrasensible, rápida y descentralizada, especialmente en entornos de biopsia líquida. Se examinan los principales desafíos, incluida la heterogeneidad intratumoral, los variantes de baja frecuencia alélica, los artefactos asociados con FFPE y la evolución clonal bajo presión terapéutica, dentro de un marco traslacional.

Además, analizamos las barreras críticas para la implementación clínica, incluido el establecimiento de estándares, el costo y la accesibilidad global de los diagnósticos moleculares, y describimos posibles soluciones a través de tecnologías escalables y estrategias de pruebas descentralizadas. Proponemos que las pruebas óptimas de BRAF requieren una estrategia informada por la sub clase de mutación e integrada clínicamente, que combine un perfilado completo inicial con un seguimiento molecular longitudinal. Los futuros paradigmas diagnósticos probablemente integrarán datos multiómicos y la interpretación asistida por inteligencia artificial (IA) para refinar la implementación de la oncología de precisión. De cara al futuro, proponemos que las pruebas óptimas de BRAF requerirán la integración del perfilado multiómico con la interpretación asistida por IA, lo que permitirá la clasificación automatizada de variantes, el apoyo a la toma de decisiones clínicas en tiempo real y la mejora de la predicción de la respuesta y la resistencia terapéuticas.